Sanger測序

服務介紹 Service Introduction

艾基生物擁有多臺ABI 3730XL測序儀, 有近十年的 Sanger 測序經驗，針對樣品的復雜程度摸索出一系列的解決方案，并且在 Sanger 測序平臺的基礎上將應用擴展至分子生物學上游的多個領域，包括：SNP 檢測，片段分析， SSR/STR 分型，基因檢測，菌種鑒定，線粒體測序，基因組測序，跑板等服務。

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艾基生物Sanger測序電子訂單

平臺優勢 Service Advantages

質量穩定：精確讀長達 800 bp 以上，有效讀長度超過 900 bp。

準確度高：QV20+ 和 CRL 值 >1000。

時效性強：日均處理量 >2000 個反應，結果及時、準確，最快 24 小時出結果。

困難模板：成熟的方案應對 High GC，AT rich，發夾結構，重復序列。

一站式服務：基因組提取、引物設計、PCR 擴增、Primer Walking、測序及結果分析。

技術流程 Technical Procedures

樣品要求 Sample Requirenments

【菌液和平板】

需過夜培養的菌液，至少提供 200 ul；無需培養可直接提取的樣品，請提供 2-4 ml 過夜培養的菌液；

樣品請注明抗性，常備抗生素：氨芐青霉素 (Amp)、卡那霉素 (Kan)、氯霉素 (Chl)；

若菌液所含質粒為超低拷貝，請直接提供質粒；

除大腸桿菌以外的菌液，請直接提供質粒。

【質粒】

濃度 >50 ng/ul，總體積不少于 10 ul；

請確保質粒溶解于滅菌的雙蒸水中，TE 溶解的質粒會造成反應失敗。

【PCR 產物】

已純化 PCR 產物：請確保 DNA 溶解于滅菌的雙蒸水中，濃度 >30 ng/ul，總體積不少于 20 ul。

未純化 PCR 產物：請注明片段長度，條帶是否單一，原液總體積不少于 20 ul；

片段 < 100 bp 建議克隆后測序，片段 > 4 kb 建議分段擴增后測序。

【測序引物】

濃度 ≥ 5 pmol/ul，總體積不少于 10 ul，并確保溶解于滅菌的雙蒸水中；

測序引物長度盡量控制在 20-30 bp，引物過短或過長均會影響測序質量；

含兼并堿基熒光標記或修飾的引物不適用于測序。

注意事項 Notes

樣品登記表需按要求填寫詳細，避免問題訂單帶來的實驗延誤；

確保樣品與登記表名稱一致，可包含“字母”“數字”“—”；請避免出現漢字、拉丁字母及其他特殊字符；

填寫“測通”的樣品會默認拼接，“雙向”測序的樣品如需拼接請注明；

如樣品為菌液或平板，請注明抗生素類型；

若測序引物不是通用引物，請自備或委托合成，選擇引物類型（通用 / 新送 / 已送 / 需合成）并注明濃度；

若送測質粒不是常用載體，通用引物請寫明引物全稱；

未純化 PCR 產物若已檢測為單一條帶，請在訂單中注明，可大大提高測序成功率；

存在特殊結構的，如：High GC、AT rich、重復序列、發夾結構請在訂單上備注；

大量樣品送測時，請使用電子訂單，方便核對且不易出錯。